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过敏性休克逝世亡豚鼠脏器中IgE蛋白表达

时间:2019-06-24    点击: 次    来源:搜集转载    作者:佚名kmteckels.com - 小 + 大年夜

过敏性休克逝世亡豚鼠脏器中ige蛋白表达

    【关键词】  过敏性反响

    【摘要】  目标: 检测过敏性休克逝世亡豚鼠脏器中ige的蛋白表达情况,商量法医学剖断过敏性休克的病理形状学诊断标准. 办法: 建立豚鼠异种血清过敏性休克模型,应用组织芯片技巧、采取免疫组化办法sp法检测25例过敏性休克逝世亡鼠脏器中ige蛋白的表达情况,并与惯例切片比较. 成果: 过敏性休克逝世亡豚鼠在肺小血管壁及其血管四周 ,气管黏膜上皮内、小血管壁及结缔组织和脾髓质中ige蛋白呈阳性表达,而肝、肾、心等脏器中ige蛋白表达呈阴性. 结论: 过敏性休克时,肺、气管和脾组织中可检见ige.

  【关键词】  过敏性反响;ige;组织芯片技巧;免疫组织化学;豚鼠

  0引言

  过敏性休克是ⅰ型掉常反响,多数短时间内产逝世活亡[1]. 豚鼠在致敏后血清总ige明显降低,抗原再次进击前血清ige抗体明显高于再次进击后休克逝世亡者,提示ige能够在组织中存留. 我们在200401/200410应用组织芯片技巧、采取免疫组化办法检测过敏性休克逝世亡豚鼠脏器中ige的表达情况,并与惯例病理技巧停止比较.

  1材料和办法

  1.1材料

  多人混淆的正常血清,井冈山学院2003级妇幼班部分先生供给. 纯种hartly豚鼠40只,雌雄不拘,体质量200~250 g,随机分为正常对比组(8只)和实验组(32只),由江中医学院实验植物中间供给. 兔抗人ige抗体、sp试剂盒及dab显色液均购自dako生物技巧无限公司武汉分公司. 过敏性休克植物模型的建立参照文献 [2]. 实验组豚鼠的一侧后爪掌皮内注致敏原0.15~0.20 ml,构成皮丘. 致敏后豢养20 d后(豢养时代共逝世亡5只,个中实验组4只,对比组1只)于胸前区搏动最明显处刺入心腔,见有搏动性回血后打针人血清1 ml,引发过敏性休克,休克产生率100%,逝世亡率89.3%. 取心、肺、肝、肾、脾、胃、肠、甲状腺、气管等组织,40 g/l甲醛液固定,备作组织芯片,行he染色和免疫组化染色. 对比组豚鼠的一侧后爪掌皮内打针心思盐水0.15~0.20 ml,豢养20 d后,心腔内打针心思盐水1 ml,未出现上述过敏症状,未逝世亡. 断头处逝世后取组织作上述处理.

  1.2办法

  组织芯片的制备参照文献[3],用手工办法制造组织芯片. 免疫组化染色sp法染色按试剂盒解释书停止,以pbs代替一抗、二抗、抗生素蛋白链霉亲和素辣根过氧化物酶尴尬刁难比. 在光学显微镜下对切片ige染色阳性格况停止半定量评价,阳性反响呈棕黄色,定位于细胞质、血管壁及结缔组织内. 评分标准: ① 按细胞显色有没有及深浅计分: 无显色0分,浅黄色1分,棕黄色2分,黄褐色3分. ② 按显色区域的比例计分: 无显色区域0分,显色区域10%~15% 1分,显色区域16%~50% 2分,显色区域51%~100% 3分. 再以两项计分之积断定成果: 2分以下为阴性(-),2分为弱阳性(+),3分为阳性(),4分以上为强阳性(). 统计学处理采取秩和考验.

  2成果

  实验组豚鼠均于抗原进击后0.5~1 min开端出现活动增添,继而竖毛,躁动,呼吸艰苦,四肢脆弱,抽搐,大年夜小便掉禁,最后25只豚鼠逝世亡;3只豚鼠症状逐步减缓. 逝世后解剖检查,肉眼所见: 实验组和对比组各脏器均出现急骤逝世亡的普通病理改变;镜下所见: 实验组在肝、肾、脾间质及气管与胃肠黏膜下见大批嗜酸性粒细胞浸润,对比组未见嗜酸性粒细胞浸润,实验组肺水肿较对比组明显. 在9个组织芯片中,对比组7例,在肺、肝、肾、脾、胃、肠等9个脏器组织均呈阴性反响;实验组25例,肺小血管壁及血管四周均出现浅黄色或棕黄色阳性区域,气管黏膜上皮细胞质、小血管壁及结缔组织出现浅黄色或棕黄色区域;脾髓质出现浅黄色区域和棕黄色阳性细胞;心、肝、胃、肠等脏器组织无显色. 惯例病理切片的肺、气管、肾、脾等4个脏器组织行免疫组化sp染色,对比组一切脏器组织呈阴性反响,实验组休克逝世亡25例肺小血管壁及血管四周均出现浅黄色或棕黄色阳性区域,气管黏膜上皮细胞质、小血管壁及结缔组织出现浅黄色或棕黄色区域;脾髓质出现浅黄色区域和棕黄色阳性细胞;心、肝、胃、肠等脏器组织无显色. 组织芯片免疫组化染色与惯例病理切片免疫组化染色比较,阳性强度及范围均根本分歧,无明显性差别(p>0.05,表1).表1组织芯片与惯例病理切片免疫组化染色成果比较(略)

  3评论辩论

  临床大年夜量实际证明,各类类型的掉常反响血清中总ige均降低[4]. 我们在肝、心、肾等组织均末检出ige,在肺、气管、脾等组织中检出多量ige,提示肺、气管能够是过敏性休克中受累最重的器官. 肺、气管、脾检出ige能够有助于从病理形状学角度诊断过敏性休克. 组织芯片包容的信息量大年夜,省时、省力、节约试剂,又增添了实验误差. 并且这两种办法免疫组化标记成果根本分歧(p>0.05),与fernebro等[5]比较20例直肠癌组织微阵列和大年夜切片p53蛋白表达的成果分歧. 本实验576个阵列点,有效点数91%. 比文献[6]报导的组织微阵列制造效力已从早期的70%阁下进步到了90%略高,能够是与本次实验取之新鲜组织而不是存档蜡块组织有关. 我们认为,可从组织拔取、阵列蜡块制造和切片等多个环节加以改进,方可进步组织微阵列制造的效力.

  【参考文献】

  [1] 左止津,祝家镇. 过敏性休克逝世亡体内白三烯变更的研究 [j]. 中公法医学杂志,1992;7(3):141.

  [2] 郭薇,陈玉川,成建定,等. 豚鼠过敏性休克ige 和c5复合物分布及ckit蛋白表达[j]. 中山医科大年夜学学报,2002;23(2):103-104.

  [3] 赵坡, 辛茂,王德文. 用引物介导原位标记办法检测脑胶质瘤染色体畸变[j]. 中华病理学杂志,1996;25:291.

  [4] 周亦武. 药物过敏性休克的病理变更及其法医学剖断[j]. 中公法医学杂志,1993;5(3):167.

  [5]  fernebro  e, dictor  m, bendahl  po, et al. evaluation  of  the tissue  microarray  technique  for  immunohistochemical analysis in rectal cancer [j]. arch pathol lab med, 2002;126(6):702-705.

  [6]  torhorst j, bucher c, kononen j, et al. tissue microarray for rapid linking of molecular changs to clinical endpoints [j]. am  j  pathol, 2001;159(6):2249-2256.

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